Mark Ruffalo é um ator premiado que iniciou sua formação artística ao frequentar aulas no Stella Adler Conservatory e, posteriormente, cofundou a Orpheus Theatre Company, um estabelecimento Equity-Waiver, onde atuou em quase todas as funções. Passou pela atuação, roteiro, direção e produção, além de operar a iluminação e construir cenários enquanto construía seu currículo.

Na transição para o cinema e a TV, a estreia cinematográfica de Mark foi no papel do andarilho Christian no filme de terror Mirror Mirror 2: Raven Dance (1994), retornando à série no papel de Joey em Mirror Mirror 3: The Voyeur (1996). Continuou nos anos 1990 com papéis secundários no filme de terror The Dentist (1996), ao lado de Corbin Bernsen; uma atuação divertida na obscura comédia dramática The Last Big Thing (1996); um papel terceiro creditado na comédia de idosos brigões A Fish in the Bathtub (1998), com Jerry Stiller e Anne Meara; e no drama de guerra Ceremony... The Ritual of Love (1976), dirigido por Ang Lee.

Trabalhando como bartender por quase uma década para se sustentar e desanimado o suficiente para desistir, um encontro casual e a consequente colaboração com o dramaturgo e roteirista Kenneth Lonergan às vésperas do novo milênio mudaram tudo. Ruffalo conquistou sucesso em Nova York com a peça off-Broadway de Lonergan, "This Is Our Youth", de 1996, uma história sobre jovens problemáticos. Isso o levou ao papel masculino principal no drama cinematográfico vencedor do Oscar de Lonergan, You Can Count on Me (2000), interpretando o irmão irresponsável de Laura Linney. A atuação recebeu críticas entusiasmadas e comparações com um jovem Marlon Brando.

Ruffalo nunca olhou para trás. Seguiram-se papéis notáveis em The Last Castle (2001), XX/XY (2002) e Windtalkers (2002), embora em 2002 Ruffalo tenha sido diagnosticado com um neuroma acústico, um tipo de tumor cerebral. Embora o tumor fosse benigno, a cirurgia resultante levou a um período de paralisia facial parcial, da qual se recuperou totalmente. Em 2003, Ruffalo conquistou papéis principais ao lado de duas populares estrelas femininas, interpretando um detetive de polícia ao lado de Meg Ryan em In the Cut (2003) e o interesse amoroso de Gwyneth Paltrow na comédia View from the Top (2003).

Embora ambos os filmes tenham sido decepções de bilheteria de alto perfil, Ruffalo seguiu para quatro filmes notáveis (embora muito díspares) em 2004 — We Don't Live Here Anymore (2004), Eternal Sunshine of the Spotless Mind (2004), 13 Going on 30 (2004) e Collateral (2004) — que solidificaram sua capacidade de ser tanto um protagonista popular quanto um ator de elenco aclamado, seja em comédia ou drama.

Após 2004, Ruffalo esteve consistentemente em atividade, com papéis principais em filmes populares de Hollywood e produções independentes que continuaram a consolidá-lo como um dos atores mais consistentemente fortes do cinema: Just Like Heaven (2005), All the King's Men (2006), Zodiac (2007), Reservation Road (2007) e The Brothers Bloom (2008). Ele também fez sua estreia na Broadway como Moe Axelrod na peça "Awake and Sing!"

Em 2010, Ruffalo alcançou algo como um avanço, ao dirigir o filme independente Sympathy for Delicious (2010), que lhe rendeu o Prêmio Especial do Júri no Festival de Sundance, e ao coestrelar como o pai doador de esperma para o casal lésbico formado por Annette Bening e Julianne Moore em The Kids Are All Right (2010). Seu papel na idiossincrática comédia/drama doméstica lhe rendeu indicações ao Oscar, ao Independent Spirit Award, ao Screen Actors Guild e ao BAFTA de Melhor Ator Coadjuvante. Ele conquistou mais duas indicações de Melhor Ator Coadjuvante como um campeão olímpico de luta em Foxcatcher (2014) e como um jornalista que trabalha para revelar o escândalo de abuso sexual da Igreja Católica em Spotlight (2015). Em 2017, o ator retornou à Broadway em "The Price", de Arthur Miller.

Seguiram-se papéis de alto perfil em Shutter Island (2010), de Martin Scorsese, e no longamente adiado filme de Lonergan, Margaret (2011), antes da aparição de Ruffalo como Dr. Bruce Banner, também conhecido como Hulk, no blockbuster de Joss Whedon, The Avengers (2012). Recebendo críticas altamente positivas por um papel no qual os atores Eric Bana e Edward Norton não encontraram sucesso em filmes anteriores, Ruffalo se tornou uma estrela de ação de bilheteria, além de um ator aclamado pela crítica. Ele retornou frequentemente ao papel de Banner/Hulk em filmes da Marvel como Iron Man Three (2013), Avengers: Age of Ultron (2015), Thor: Ragnarok (2017), Avengers: Infinity War (2018), Captain Marvel (2019) e Avengers: Endgame (2019).

Reunido com a ex-colega de elenco Gwyneth Paltrow na comédia dramática sobre dependência sexual Thanks for Sharing (2012), ele conquistou uma indicação ao Globo de Ouro por interpretar um pai bipolar em Infinitely Polar Bear (2014). Ruffalo também assumiu o papel principal na adaptação de Ryan Murphy da peça sobre Aids de Larry Kramer, The Normal Heart (2014), e conquistou um prêmio do SAG e uma indicação ao Emmy. Mais tarde, levou o Emmy para casa interpretando irmãos gêmeos, um deles esquizofrênico paranoico, em I Know This Much Is True (2020).