Mark Ruffalo es un actor ganador de premios. Tomó clases en el Stella Adler Conservatory y posteriormente cofundó la Orpheus Theatre Company, un establecimiento Equity-Waiver, donde trabajó en casi todas las capacidades. Desde actuar, escribir, dirigir y producir hasta manejar las luces y construir decorados mientras construía su currículum.

Incursionando en el cine y la televisión, el poco auspicioso debut cinematográfico de Mark fue el papel del vagabundo Christian en la película de terror Mirror Mirror 2: Raven Dance (1994) y regresó a la serie de películas en el papel de Joey con Mirror Mirror 3: The Voyeur (1996). Continuó durante la década de 1990 de manera bastante indistinta con más papeles secundarios en la película de terror The Dentist (1996) protagonizada por el loco Corbin Bernsen; una actuación divertida en la oscura comedia dramática The Last Big Thing (1996); un papel tercero en la comedia de ancianos que discuten Jerry Stiller/Anne Meara A Fish in the Bathtub (1998); y el drama de guerra Ceremony... The Ritual of Love (1976) dirigido por Ang Lee.

Trabajó como bartender durante casi una década para llegar a fin de mes y se desanimó lo suficiente como para dejarlo, un encuentro casual y la colaboración resultante con el dramaturgo/guionista Kenneth Lonergan acercándose al milenio lo cambió todo. Ruffalo ganó éxito en Nueva York en la obra off-Broadway de Lonergan de 1996 "This Is Our Youth", una historia sobre jóvenes adultos problemáticos. Esto lo llevó a su papel protagónico masculino en el drama cinematográfico ganador del Oscar de Lonergan You Can Count on Me (2000), interpretando al hermano inútil de Laura Linney. La actuación recibió críticas entusiastas e invitó a comparaciones con un Marlon Brando temprano.

Ruffalo nunca miró atrás. Siguieron papeles notables en The Last Castle (2001), XX/XY (2002) y Windtalkers (2002), aunque en 2002 a Ruffalo se le diagnosticó un neuroma acústico, un tipo de tumor cerebral. Aunque el tumor era benigno, la cirugía resultante provocó un período de parálisis facial parcial, del cual se recuperó por completo. En 2003, Ruffalo obtuvo papeles principales junto a dos populares estrellas femeninas, interpretando a un detective de policía junto a Meg Ryan en In the Cut (2003) y el interés amoroso de Gwyneth Paltrow en la comedia View from the Top (2003).

Aunque ambas películas fueron decepciones de taquilla de alto perfil, Ruffalo pasó a cuatro películas notables (aunque muy dispares) en 2004 -- We Don't Live Here Anymore (2004), Eternal Sunshine of the Spotless Mind (2004), 13 Going on 30 (2004) y Collateral (2004) -- que solidificaron su capacidad para ser tanto un protagonista popular como un actor de conjunto aclamado en comedia o drama.

Después de 2004, Ruffalo estuvo constantemente trabajando, con papeles principales en populares películas de Hollywood y producciones independientes que continuaron solidificándolo como uno de los actores más consistentemente fuertes del cine: Just Like Heaven (2005), All the King's Men (2006), Zodiac (2007), Reservation Road (2007) y The Brothers Bloom (2008). También hizo su debut en Broadway como Moe Axelrod en la obra "Awake and Sing!"

En 2010 Ruffalo logró algo así como un avance, al dirigir la película indie Sympathy for Delicious (2010), que le valió el Premio Especial del Jurado en el Festival de Cine de Sundance, y coprotagonizar como el padre donante de esperma de la pareja lesbiana Annette Bening y Julianne Moore en The Kids Are All Right (2010). Su papel en la idiosincrásica comedia/drama doméstica le valió nominaciones al Academy Award, Independent Spirit Award, Screen Actors Guild y BAFTA al Mejor Actor de Reparto. Luego obtuvo dos nominaciones más al Mejor Actor de Reparto como un campeón de lucha olímpica en Foxcatcher (2014) y como un periodista que trabaja para descubrir el escándalo de abuso sexual de la Iglesia Católica en Spotlight (2015). En 2017, el actor regresó a Broadway en "The Price" de Arthur Miller.

Siguieron papeles de alto perfil en Shutter Island (2010) de Martin Scorsese y la película largamente retrasada de Lonergan Margaret (2011) antes de la aparición de Ruffalo como el Dr. Bruce Banner, alias The Hulk, en el éxito de taquilla de Joss Whedon The Avengers (2012). Obtener críticas muy positivas por un papel en el que los actores Eric Bana y Edward Norton no pudieron encontrar el éxito en películas anteriores convirtió a Ruffalo en una estrella de acción de taquilla además de un actor aclamado por la crítica. Regresó frecuentemente al papel de Banner/Hulk en películas de Marvel como Iron Man Three (2013), Avengers: Age of Ultron (2015), Thor: Ragnarok (2017), Avengers: Infinity War (2018), Captain Marvel (2019) y Avengers: Endgame (2019).

Reunido con su ex coprotagonista Gwyneth Paltrow en la comedia dramática sobre adicción al sexo Thanks for Sharing (2012), luego obtuvo una nominación al Golden Globe por interpretar a un papá bipolar en Infinitely Polar Bear (2014). Ruffalo también asumió el papel principal en la adaptación de Ryan Murphy de la obra de teatro sobre el SIDA de Larry Kramer The Normal Heart (2014) y ganó un SAG Award y una nominación al Emmy. Más tarde se llevó el Emmy interpretando a hermanos gemelos, uno esquizofrénico paranoico, en I Know This Much Is True (2020).